免疫細胞與胃癌的關系

　　當人們發現T淋巴細胞有殺傷腫瘤細胞之後，曾致力於被動輸入淋巴細胞，但是輸入一般胸腺細胞，效果不甚明確，自1976年以來，開始用淋巴因子，特別是用白介素刺激淋巴細胞增生以來，有很大發展。 　　LAK細胞 　　LAK細胞是淋巴因子激活殺傷細胞（lymphokine acitvated killer）的簡稱，1976年，morgan發現絲裂原刺激的淋巴細胞培養上清液中存在一種因子，它能夠選擇性地維持T淋巴細胞在體外長期培養，人們將它稱為T細胞生長因子，1979年統一將白細胞之間相互作用的因子統稱為白細胞介素（Interleukin ，IL） ，對T淋巴細胞生長因子稱為白細胞介素-2，繼而有人（Yrom 及Rosenberg，1980）證明人外周血淋巴細胞經IL-2培養後，誘導出一種具有抗腫瘤高活性的殺傷細胞，後來稱為淋巴因子激活的殺傷細胞，即LAK細胞。 　　LAK細胞的特點：LAK細胞不需抗原刺激，就能殺傷NK細胞所不能殺傷的腫瘤細胞，殺傷作用不受MHC限制，它可殺傷同基因型，同種異體，甚至異種異體瘤細胞，LAK細胞的類型不一，人外周血淋巴細胞中的LAK細胞的前體細胞表達有NK細胞的標志，有Leu19及Leu11（CD16）的標志，但是沒有T細胞的標志，它和NK細胞相似，又不同於NK細胞，可能來源於另一細胞郡。 　　LAK細胞的抗癌效果：IL-2及淋巴細胞單獨時殺傷瘤細胞，治療腫瘤的效果很差。 　　IL-2/LAK細胞療法存在 的問題，①副作用明顯，常見的復作用是毛細血管滲漏綜合征（Gapillary leak syndrome），主要表現為全身性水腫及多髒器功能失調 ，嚴重者可致胸，腹腔積液，肺間質水腫，呼吸緊迫綜合征及充血性心力衰竭，發熱是病人常見的現象，②是來源困難，LAK細胞需要量大 ，最好在109以上，因此用外周血淋巴細胞經過培養達到這種數量有一定困難，此外，IL-2需要量也大。 　　其它LAK細胞：除IL-2產生LAK細胞外，另有許多產生LAK細胞的方法，現介紹主要的兩種。 　　CD3/LAK細胞，T細胞表面有CD3分子，與T細胞受體組成CD3-T細胞受體復合物，因此CD3的單克隆抗體對T細胞有強絲裂原作用，單獨使用CD3抗體，對淋巴細胞激活力量小，但用少量抗體 （腹水1份）與效應細胞懸液（500份），外加微量IL-2（30單位/ml）進行培養時，第二天淋巴細胞開始增殖，到第2～3周，可增殖到5×104倍以上，加CD3抗體培養的LAK細胞，大部分為T細胞，而且具有非MHC限制的細胞毒性，CD3/LAK細胞比單純IL-2/LAK細胞的細胞毒性高6～23倍。 　　腫瘤壞死因子（Tumor necrosis factor，TNF），單獨使用不能誘導LAK細胞，但在IL-2以外加TNF，可增強LAK細胞的活性。 　　抗腫瘤單克隆抗體，與IL-2一起培養單個核細胞，也可增強LAK細胞殺傷該腫瘤細胞的活性。 　　抗胃LAK細胞的制備 　　單個核細胞的分離，取外周血，加肝素抗凝（50單位/ml血），加等量培養液1640混合後加在Fiooll分離液分層液面上離心20分鐘（2000轉/分），取中、上層交界處的白色雲霧狀狹窄帶，即單個核細胞層，經1640洗滌後制成細胞懸液。 　　用含10%小牛血清液及青霉素的培養液中加IL-2300單位/ml，制備IL-2/LAK細胞，加入1：500的CD3腹水及IL-230單位/ml，制備CD/LAK細胞。 　　LAK細胞的擴增，至 第二周末IL-2/LAK細胞增長約20倍，CD3/LAK增長130倍。 　　抗胃癌LAK細胞的應用效果 　　用IL-2/LAK細胞，以胃癌細胞系靶細胞，進行細胞毒試驗，以噻唑 蘭（MTT）為損傷 的批示劑可見它在適應濃度時，對腫瘤細胞有40%的殺傷作用，而CD3/LAK可有60%的殺傷率，將胃癌細胞接種裸鼠皮下，第1周可長出瘤結節，用IL-2/LAK細胞及CD3/LAK細胞進行治療，CK3/LAK細胞抑制腫瘤生長的效果，第6周才開始長出瘤結節（白雲飛等，1992），臨床上使用LAK細胞對胃癌術後的轉移有一定抑制作用（田志剛等，1987）。 　　TIL細胞 　　TIL細胞為腫瘤浸潤細胞（ Tumor infiltrating lymphayte， TIL）是繼LAK細胞之後，第二代抗腫瘤淋巴細胞。 　　TIL細胞的歷史：早在1922年就有人提出腫瘤浸潤淋巴細胞的概念，但在早期的研究著重從組織學看淋巴細胞浸潤的多少以及與癌的分型和預後的關系，繼而用機械的辦法進行分離，1975年單克隆抗體技術問世以來，對淋巴細胞的亞型分析，使人們對這些細胞的亞型，如是B細胞還是T細胞，是T輔助細胞還是抑制細胞，有了進一步的認識，後來Rosenberg有膠原酶消化的方法替代機械分離，在IL-2的幫助下，TIL細胞對體外腫瘤細胞的殺傷，在體內對有些腫瘤的治療都取得了肯定的效果，較LAK細胞的療效高出50～100倍。 　　TIL細胞的一般情況和療效：目前已建立了一套TIL細胞的 分離、提出和培養的方法，在體外實驗，動物實驗及病人體內應用，均取得了良好的效果，當前已證明在黑色素瘤、腎細胞癌、肉瘤和腺癌、鱗狀細胞癌、肺癌等實體瘤中，TIL細胞可成千倍的擴增，而且在動物實驗以及病人應用時，都證明有一定效果，初步展示了TIL細胞的特殊抗癌活性。 　　胃癌TIL細胞的制備及應用 　　①胃癌TIL細胞的分離與培養： 　　取新鮮胃癌手術標本，除去壞死組織，切碎，用Hank氏液洗去血液，再加入含0。1%的膠原酶、 0。002%DNA酶、0。01%透明質酸酶及抗菌素的1640培養液，在室溫下攪拌過夜。，經200目鋼網過濾，去除未消化的組織塊，再用Hank氏液或1640洗兩次，，制成2×106/ml左右的細胞懸液進行梯度密度離心潮（2000轉/分）20分鐘，吸取75%與100%分離液面之間的白色雲霧層，富含TIL細胞，用Hank氏液洗滌，離心，末次離心後，用0。2%台盼蘭染色計數活細胞，最後用24孔板培養。 　　培養時，培養液應含10%人血清、青霉素、鏈霉素、兩性霉素，Hepes緩沖劑及L-谷氨酰胺，培養液中還需加1000單位/ml的IL-2，培養2～3周。 　　②TIL細胞體外及體內殺傷瘤細胞的實驗： 　　以胃癌細胞系SGC-7901為靶細胞，經過復蘇及培養後，將其 調成1×105/ml 細胞數，加入96孔板中，每孔100μl，再加入 不同濃度的效應細胞，與靶細胞構成不同的比例，以MTT作為殺傷程度的指標，培養液中加過不同濃度的IL-2，在第14天，TIL細胞對胃癌細胞的殺傷作用達到最高水平，而不加IL-2者，不出現殺傷，TIL細胞對胃癌細胞的殺傷率一般為35%～50%。TIL細胞的優點和存在的問題： 　　TIL細胞的優點很多：①可直接從病人活何檢標本，腫瘤引流的淋巴結以及 胸腹水中提出，從而避免了由病人外周血制備，因此更適合體質虛弱的病人；②TIL細胞可長期擴增，增殖力超過LAK細胞，容易達到治療所需的細胞數量；③TIL細胞特異性及抗癌活性高，不損害其它正常細胞；④對IL-2依賴性低，免於使用大量IL-2帶來的副作用；⑤大劑量使用時，一般可以耐受，很少毒副作用；⑥配合化療，可增強TIL細胞的體內療效，上術優點均為LAK細胞所不及。 　　TIL細胞只能應用同系動物或自體的淋巴細胞。制備步驟復雜，有待進一步改進，與其它淋巴因子的關系以及在體內殺傷瘤細胞的機制尚待進一步研究。 　　總之，TIL細胞目前不失為一種有效的治療腫瘤的措施之一，臨床療效，特別在胃癌方面的療效需要進一步擴大驗證。          更多知識：胃癌的“情緒”化 必讀：秋季養胃“五要領” 經常吃夜宵 更易得胃癌 牛奶and紅茶 養胃好搭檔 大蒜是寶 能把腫瘤擋門外 上班族 入秋別忘了養胃 養胃 莫犯以下“四忌” 晚餐太“好” 胃會“生病” 送給胃炎患者的四款養胃菜 吃隔夜菜吃出胃癌來 胃病每月精彩熱文TOP10 　　更多精彩內容　請點擊39胃病頻道